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Exercices de chromatographie :


Correction exercice 1 :

1 - Cet exercice met en jeu une chromatographie d'exclusion (encore appelée : tamisage moléculaire, gel filtration, perméation de gel). La connaissance du débit de la colonne (5 ml / min) et des différents temps de rétention nous permet de calculer le volume d'élution pour chaque composé (voir tableau), selon la relation :

Ve (volume d'élution) = d (débit) x tr (temps de rétention)

La représentation graphique du log de la masse moléculaire (log MM) qu'il faut calculer préalablement (voir tableau) en fonction du volume d'élution (Ve) nous donne une droite :

 MMLog MMtr (min)Ve (ml)
Aldolase1450005,1610,452
Lactate déshydrogénase1350005,1311,457
Phosphatase alcaline800004,918,492
Ovalbumine450004,6526,2131
Lactoglobuline371004,5728,6143


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Le fait de visualiser une droite signifie qu'aucune protéine n'est exclue du gel.

2 - La glucokinase, avec un temps de rétention de 21 min, est éluée à un volume d'élution de 5 x 21 = 105 ml. Il suffit de se reporter au graphe pour déterminer un log de MM = 4,82 environ, soit une masse moléculaire de 66070 Da (ou 66070 g/mol ou 66,07 kDa), environ.

Ici, on a tracé le logarithme de la masse moléculaire en fonction du volume d'élution : log MM = f (Ve).

L'autre représentation serait de porter le logarithme de la masse moléculaire en fonction du KAV, le coefficient de partage entre la phase liquide et la phase gel : log MM = f (KAV).

KAV = (Ve - Vm) / (Vt - Vm)


Mais pour cela, il faudrait connaître le volume mort (Vm) et le volume total de la colonne (Vt).


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