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Exercices de chromatographie :


Correction exercice 3 :

1 - Proportion des groupements carboxyméthyls (pKa = 4,76) chargés négativement aux pH : 1, 4,76, 7 et 9.

Le pH est donné par la relation suivante :




À pH = 1 : = pH - pKa = 1 - 4,76 = -3,76    donc : = 1,74 10-4

Sachant que (A) + (B) = 100 % et que (B) = 1,74 10-4.(A),    on en déduit que (A) + 1,74 10-4.(A) = 100

(A) est mis en facteur : (A) = 100 /(1 + 1,74 10-4)

On peut ainsi calculer le pourcentage des formes (A) et (B) : (A) = 99,98 % et (B) = 0,02 %





À pH = 4,76 : = pH - pKa = 4,76 - 4,76 = 0    donc : = 1

Sachant que (A) + (B) = 100 % et que (B) = (A),    on en déduit que (A) + (A) = 100

(A) est mis en facteur : (A) = 100 /(2)

On peut ainsi calculer le pourcentage des formes (A) et (B) : (A) = 50 % et (B) = 50 %





À pH = 7 : = pH - pKa = 7 - 4,76 = 2,24    donc : = 173,78

Sachant que (A) + (B) = 100 % et que (B) = 173,78(A),    on en déduit que (A) + 173,78(A) = 100

(A) est mis en facteur : (A) = 100 /(174,78)

On peut ainsi calculer le pourcentage des formes (A) et (B) : (A) = 0,575 % et (B) = 99,425 %





À pH = 9 : = pH - pKa = 9 - 4,76 = 4,24    donc : = 13378

Sachant que (A) + (B) = 100 % et que (B) = 173,78(A),    on en déduit que (A) + 13378(A) = 100

(A) est mis en facteur : (A) = 100 /(13379)

On peut ainsi calculer le pourcentage des formes (A) et (B) : (A) = 5,73 10-3 % et (B) = 99,994 %



Globalement, on peut donc constater qu'à un pH inférieur au pKa (pH acide), les groupements carboxyméthyls se présenteront majoritairement sous forme acide (-CH2-COOH).

À l'inverse, à un pH supérieur au pKa (pH basique), les groupements carboxyméthyls se présenteront majoritairement sous forme basique (-CH2-COO-)



2 - À pH = 7, on a pu calculer que la résine était à 99,425 % sous forme basique, chargée négativement (-CH2-COO-).

Protéine :

Ovalbumine
Cytochrome c
Lysozyme
pHi :

4,6
10,65
11
Charge à ph = 7 :

négative
positive
positive


Ainsi, seule l'ovalbumine, qui à pH = 7 est chargée négativement, ne sera pas retenue sur la colone. Le cytochrome c et le lysosyme seront retenus.



1 - 2 - 3 - 4 - 5 - 6 - 7 - 8 - 9 - 10 - 11 - 12 - 13 - 14 - 15 - 16 - 17


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