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Exercices de chromatographie :


Correction exercice 6 :

1 - Le Dalton est une unité de masse atomique et correspond à 1,66 . 10-27 kg. La masse moléculaire d'un composé s'exprimera soit en dalton (Da), soit en grammes par mole (g/mol). Noter que l'abréviation de dalton s'écrit avec un D majuscule : Da et que le kilodalton s'écrit kDa.

2 - Afin de déterminer la masse moléculaire (MM) de la protéine p (Ve = 113 ml), il faut au préalable tracer la représentation du log (masse moléculaire) = f(Ve). Le schéma ci-dessous représente le tracé de log (MM) = f(Ve) pour les composés suivants : Dextran, Fibrinogène, Catalase et Lactoglobuline.



Une colonne a été rajoutée dans le tableau pour le calcul du log de la masse moléculaire :


  MM (Da) Ve (ml) log MM
Dextran 2000000 45 6,3
Fibrinogène 340000 60 5,53
Catalase 230000 75 5,36
Lactoglobuline 19000 132 4,28


Il suffit de reporter sur le tracé : log (MM) = f(Ve), le volume de 113 ml pour en déduire un log MM = 4,93, soit une masse moléculaire de 85114 Da ou 85114 g/mol pour la protéine p.


Il est très important de noter que :

- 45 ml représente le volume mort de la colonne, c'est à dire le volume d'élution des substances exclues (ici, le dextran).

- 132 ml représente le volume d'exclusion des protéines totalement incluses.

- la droite a été traçée en ne tenant compte que des points correspondants au fibrinogène et à la catalase, car le dextran est un composé totalement exclu, alors que la lactoglobuline est une protéine totalement incluse dans le gel. Ainsi, il aurait été totalement faux de tracer une droite à partir des points correspondant à la catalase et la lactoglobuline (qui sont les protéines dont les volumes d'élution encadrent celui de la protéine p).



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