Correction de l'examen 1 :
DEUG SVTE (deuxième année) - option Biochimie Expérimentale - Université d'Aix-Marseille I - Juin 1999.
Durée conseillée : 30 minutes - 1 heure.
Vous répondrez aux questions sur la feuille suivante, que vous mettrez dans votre copie d'examen.
| Nom : .............................. |
Prénom : ............................................. |
Questions :
1 - A l'issue de la chromatographie d'exclusion (étape 1), quelles sont les trois fractions que l'on mélange ? Calculer le nombre total d'UE recueilli, ainsi que la quantité totale de protéines. Quel est le volume d'élution de l'enzyme ?
- Fractions : fractions 3, 5 et 5
- Nombre total d'UE recueilli : 9000 UE
- Quantité totale de protéines : 7,35 g
- Volume d'élution : Ve = 20 ml environ
2 - Quel est le type d'ion que peut échanger la résine de l'étape 2 ? Justifier la réponse. Donner un exemple de groupement chimique pour une telle résine.
- Type d'échangeur d'ions : Il s'agit d'une résine échangeuse de CATIONS (C+)
- Exemple de groupement : groupement -SO3- par exemple
3 - A quel pH va être réalisée l'élution pour la chromatographie échangeuse d'ions ? Justifier la réponse. Quel est le volume d'élution de l'enzyme ?
à pH > 9,6 (soit à un pH supérieur au pHi de l'enzyme : 9,6).
- Volume d'élution : Ve = 30 ml environ
4 - Déterminer le rendement de chacune des 2 étapes de purification, ainsi que le rendement global.
5 - Calculer la quantité de protéines récupérée après l'étape 2 (chromatographie d'échange d'ions). Quel est le taux de purification de l'enzyme à l'issue de chaque étape chromatographique ? Conclusion ?
(pour répondre aux questions 4 et 5, remplir le tableau ci-dessous :)
NB : le calcul nécessite de rajouter une colonne : "activité spécifique"
| |
protéines (g) : |
AE (UE) : |
rendement : |
taux de purification : |
Activité spécifique : |
| extrait : |
25 |
10000 |
/ |
/ |
400 |
| étape 1 : |
7,35 |
9000 |
90 % |
3,06 fois |
1224,5 |
| étape 2 : |
2,25 |
4910 |
54,5 % |
1,782 fois |
2182 |
- Rendement global : 49 % (soit 90 % x 54,5 %)
- Conclusion (utiliser le verso de la feuille, si nécessaire).
examen 1
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