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Exercices de chromatographie :


Correction de l'examen 1 :
DEUG SVTE (deuxième année) - option Biochimie Expérimentale - Université d'Aix-Marseille I - Juin 1999.
Durée conseillée : 30 minutes - 1 heure.

Vous répondrez aux questions sur la feuille suivante, que vous mettrez dans votre copie d'examen.





Nom : .............................. Prénom : .............................................


Questions :

1 - A l'issue de la chromatographie d'exclusion (étape 1), quelles sont les trois fractions que l'on mélange ? Calculer le nombre total d'UE recueilli, ainsi que la quantité totale de protéines. Quel est le volume d'élution de l'enzyme ?

- Fractions : fractions 3, 5 et 5

- Nombre total d'UE recueilli : 9000 UE

- Quantité totale de protéines : 7,35 g

- Volume d'élution : Ve = 20 ml environ



2 - Quel est le type d'ion que peut échanger la résine de l'étape 2 ? Justifier la réponse. Donner un exemple de groupement chimique pour une telle résine.

- Type d'échangeur d'ions : Il s'agit d'une résine échangeuse de CATIONS (C+)

- Exemple de groupement : groupement -SO3- par exemple



3 - A quel pH va être réalisée l'élution pour la chromatographie échangeuse d'ions ? Justifier la réponse. Quel est le volume d'élution de l'enzyme ?

à pH > 9,6 (soit à un pH supérieur au pHi de l'enzyme : 9,6).

- Volume d'élution : Ve = 30 ml environ


4 - Déterminer le rendement de chacune des 2 étapes de purification, ainsi que le rendement global.


5 - Calculer la quantité de protéines récupérée après l'étape 2 (chromatographie d'échange d'ions). Quel est le taux de purification de l'enzyme à l'issue de chaque étape chromatographique ? Conclusion ?

(pour répondre aux questions 4 et 5, remplir le tableau ci-dessous :)

NB : le calcul nécessite de rajouter une colonne : "activité spécifique"

  protéines (g) : AE (UE) : rendement : taux de purification : Activité spécifique :
extrait : 25 10000 / / 400
étape 1 : 7,35 9000 90 % 3,06 fois 1224,5
étape 2 : 2,25 4910 54,5 % 1,782 fois 2182


- Rendement global : 49 % (soit 90 % x 54,5 %)

- Conclusion (utiliser le verso de la feuille, si nécessaire).



examen 1


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