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Exercices de chromatographie :


Exercice 10 : On veut réaliser la séparation de 5 acides aminés (Glu, Met, Tyr, Lys, Ser). On utilise pour cela 5 g de résine sèche de polystyrène sulfoné que l'on dispose dans une colonne ouverte. La résine est lavée par une solution d'HCl (1 M) en excès. Après ce traitement, la résine est lavée à l'eau distillée. On fait alors passer une solution de NaCl (2 M) en excès. Le filtrat correspondant est recueillit dans sa totalité et est dosé par 11,5 ml de NaOH (1 M).

Questions :

1 - Commenter les opérations effectuées (écrire sommairement les équations mises en jeu) et en déduire la capacité de rétention de la résine.

2 - Les 5 acides aminés à séparer sont solubilisés dans un tampon à pH = 3,8. A ce pH, quels sont les composés qui seront retenus sur la résine ?

3 - Après avoir chargé la colonne par les 5 acides aminés préalablement solubilisés dans le tampon à pH 3,8, l'élution est réalisée en gradient de pH, en augmentant le pH. Dans quel ordre les acides aminés vont-ils être élués ?

On se servira des données ci-après :

acide aminé : pK - COOH pK - NH2 pK -R
Glu 2,19 9,67 4,25
Met 2,28 9,21 -
Tyr 2,20 9,11 10,07
Lys 2,18 8,95 10,53
Ser 2,21 9,15 -



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