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Les différentes techniques de chromatographie :



2.1.4 - LA CHROMATOGRAPHIE D'ADSORPTION EN PHASE INVERSÉES :

Principe :

C'est une chromatographie d'adsorption liquide-solide dans laquelle la phase stationnaire se distingue par son apolarité. Elle est constituée, la plupart du temps, par des silices apolaires greffées. Il existe des greffons apolaires de taille différente, de 2 à 18 atomes de carbone (C2 à C18), donc de polarités différentes.

La phase mobile est polaire et hydrophile. Les séparations sont fondées sur des interactions hydrophobes entre les molécules à séparer et la phase stationnaire.

Ainsi, plus un soluté est apolaire, plus il sera retenu au niveau de la phase solide stationnaire. A l'inverse, plus un soluté est polaire, plus il sera entraîné par la phase mobile liquide.



Figure 1 : Silices apolaires greffées.


Technologie : Dans la pratique, cette chromatographie ne s'applique qu'en HPLC, elle porte le nom de RP-HPLC (ou Reverse Phase HPLC, ou HPLC en phase inverse). La RP-HPLC s'applique bien à la séparation de petites molécules apolaires : lipides, acides aminés, peptides.

Notion de paire d'ions : Les composés ioniques tels que A- ou C+ se séparent mal dans ce type de chromatographie, d'où l'utilisation d'une technique appelée paire d'ions : on forme un ensemble neutre et apolaire tel que (A- / X+) ou (C+ / Y-) qui est chromatographié.


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