Notion de liaison totale :
Un radioligand L* (L pour Ligand et * pour radioactif) se lie à des sites spécifiques nommés R (R pour Récepteurs) et à des sites non-spécifiques (autres protéines présentes dans le milieu d'incubation). La somme de la liaison spécifique et non-spécifique constitue la liaison totale.
Lorsque l'on réalise des expériences de saturation de la liaison, à l'équilibre,
on accède à la liaison totale :
1 - La liaison totale : en présence du radioligand et après élimination du milieu et récupération des cellules, on accède à la liaison totale en comptant la radioactivité associée aux cellules. |
Notion de liaison non-spécifique :
La liaison non-spécifique est déterminée en parallèle de la liaison totale, en présence d'un grand excès de ligand froid (au moins 100 fois le Kd), capable de se lier à tous les récepteurs présents. Ainsi, le radioligand ne se liera plus qu'aux sites non-spécifiques.
2 - La liaison non-spécifique : en présence du radioligand et d'un excès de ligand froid, et après élimination du milieu et récupération des cellules, on accède à la liaison non spécifique en comptant la radioactivité associée aux cellules.
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Notion de liaison spécifique :
Après avoir déterminé la liaison totale d'une part, et la liaison non-spécifique d'autre part, il est facile de calculer la liaison spécifique, de la manière suivante :
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Liaison totale = Liaison spécifique + Liaison non-spécifique
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donc :
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Liaison spécifique = Liaison totale - Liaison non-spécifique
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Dans le cas des figures ci-dessus, où l'on a déterminé la liaison totale (en 1) et la liaison non spécifique (en 2), on aura :