3 - Expériences cinétiques de liaison - Notions de k_on et de k_off :

3.1 - Cinétique d'association d'un ligand à son récepteur ( k_on ) :

Principe :

C'est la mesure du taux d'association (kon : constante cinétique d'association) d'un ligand radiomarqué à son récepteur. Cela permet de déterminer le temps que la réaction met pour atteindre l'équilibre (et donc le temps d'incubation dans les expériences de saturation et de compétition).

Représentation des résultats :



Figure 3 : Représentation de la liaison spécifique en fonction du temps.

L'équation suivante permet de linéariser les résultats :



k_obs : en min^-1
Y_max = liaison spécifique maximale observée au cours de l'expérience (Y_max dépend de la concentration initiale en radioligand).

NB : Y_max n'est pas égal au B_max, car la concentration intiale en radioligand n'est pas saturante.


ATTENTION : On peut démontrer que la constante mesurée ici est différente de k_on : on l'appellera k_obs (observée). A partir de k_obs, on déterminera k_on selon l'équation :


Donc :
k_obs = ( k_on.(radioligand) ) + k_off

k_obs : en min^-1
k_on : en M^-1 . min^-1
k_on = (k_obs - k_off ) / (L*)


RAPPEL : Une fois que l'on a déterminé les constantes cinétiques d'association et de dissociation, il est possible d'en déduire le K_d :




k_on : constante cinétique d'association (k_a)
k_off : constante cinétique de dissociation (k_d)
K_d : constante de dissociation à l'équilibre (affinité)