3 - Expériences cinétiques de liaison - Notions de k_on et de k_off :

3.2 - Cinétique de dissociation de la liaison (k_off ) :

Principe :

C'est la mesure du taux de dissociation (koff : constante cinétique de dissociation) d'un ligand radiomarqué depuis son récepteur. La liaison est réversible.

Deux étape sont nécessaires pour étudier ce phénomène de dissociation :

• Liaison à l'équilibre d'une concentration donnée de radioligand.
• Induction de la dissociation en éliminant le ligand radiomarqué libre.

Représentation des résultats :




Figure 1 : Représentation de la liaison totale en fonction du temps. (NS : liaison non spécifique).

Axe des y : cpm ; nombre de sites / cellule ; fmol / mg de protéines.

* On observe une décroissance exponentielle de la liaison selon un taux égal au k_off (k_off : en min^-1).

On peut démontrer que le temps permettant 50 % de dissociation est égal à :

t1/2 = ln 2 / koff

La représentation suivante permet de déterminer précisément koff :



Figure 2 : Représentation du ln de la liaison spécifique en fonction du temps.

La pente est égale à -k_off

NB : ici, il faut utiliser le ln (et non pas le log) de la liaison spécifique.